Pruebas citogenéticas, bioquímicas y moleculares

Varios métodos diferentes se utilizan actualmente en los laboratorios de pruebas genéticas.
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El tipo de prueba dependerá del tipo de anomalía que se esté midiendo. En general, hay tres tipos principales de pruebas genéticas disponibles: citogenética, bioquímica molecular.

Pruebas citogenéticas.

La citogenética implica el examen de cromosomas completos para detectar anomalías. Los cromosomas de una célula humana en división se pueden analizar claramente bajo un microscopio. Los glóbulos blancos, específicamente los linfocitos T, son las células más accesibles para el análisis citogenético porque se extraen fácilmente de la sangre son capaces de una rápida división en el cultivo celular. Las células de tejidos como la médula ósea (para la leucemia), el líquido amniótico (para el diagnóstico prenatal) otras biopsias de tejidos también se pueden cultivar para el análisis citogenético.

Después de varios días de cultivo celular, los cromosomas se fijan, se extienden en portaobjetos de microscopio, luego se tiñen Los métodos de tinción para análisis de rutina permiten que cada uno de los cromosomas se identifique individualmente. Las distintas bandas de cada cromosoma reveladas por la tinción permiten el análisis de la estructura cromosómica.

Pruebas bioquímicas.

La enorme cantidad de reacciones bioquímicas que ocurren habitualmente en las células requieren diferentes tipos de proteínas. Existen varias clases de proteínas, como enzimas, transportadores, proteínas estructurales, proteínas reguladoras, receptores hormonas para cumplir múltiples funciones. Una mutación en cualquier tipo de proteína puede resultar en una enfermedad si la mutación da como resultado que la proteína no funcione correctamente.

Tipos de cambios de proteínas que resultan en una función alterada

• Ninguna proteína hecha
• Demasiada o muy poca proteína hecha
• Proteína mal plegada o hecha
• Sitio activo alterado en otra región crítica
• Proteína incorrectamente modificada
• Proteínas localizadas incorrectamente (acumulación de proteínas)
• Proteína ensamblada incorrectamente

Las pruebas clínicas para una enfermedad bioquímica utilizan técnicas que examinan la proteína en lugar del gen. Se pueden desarrollar pruebas para medir directamente la actividad de las proteínas (enzimas), el nivel de metabolitos (medición indirecta de la actividad de las proteínas) el tamaño la cantidad de proteínas (proteínas estructurales). Estas pruebas requieren una muestra de tejido en la que está presente la proteína, generalmente sangre, orina, líquido amniótico líquido cefalorraquídeo. Debido a que las proteínas son menos estables que el ADN pueden degradarse rápidamente, la muestra debe recolectarse, almacenarse adecuadamente y enviarse de inmediato de acuerdo con las especificaciones del laboratorio.

Pruebas moleculares

Para mutaciones pequeñas de ADN, la prueba directa de ADN puede ser el método más efectivo, particularmente si la función de la proteína es desconocida y no se puede desarrollar una prueba bioquímica. Una prueba de ADN se puede realizar en cualquier muestra de tejido y requiere cantidades muy pequeñas de muestra. Algunas enfermedades genéticas pueden ser causadas por muchas mutaciones diferentes, lo que dificulta las pruebas moleculares. Por ejemplo, más de 1.000 mutaciones en el gen regulador de la conductancia transmembrana (CFTR) de la fibrosis quística pueden causar fibrosis quística (CF).

No sería práctico examinar la secuencia completa del gen CFTR de forma rutinaria para identificar la mutación causante porque el gen es bastante grande. Sin embargo, dado que la mayoría de los casos de FQ son causados por aproximadamente 30 mutaciones, este grupo más pequeño de mutaciones se prueba antes de que se realicen pruebas más completas.